易肽试剂盒焕新——酶切现代化
早上好，我们又来讲废话咯
现在通常说基于质谱的蛋白质组学，95%都是bottom-up技术大众路线。其核心步骤是将完整蛋白质酶解为肽段后，通过液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）进行多肽水平的鉴定和定量，而现在的高分辨质谱设计所能够检测最佳分子量就是胰酶酶切肽，其通常的分子m/z范围（300-2000）。
其中，消化酶的选择和酶解效率直接决定了目标蛋白的序列覆盖度和蛋白质组整体检测深度，是质谱蛋白质组分析的核心环节。
因此，长久以来我们不敢怠慢酶切步骤，一旦酶切效果不佳，不仅意味着昂贵的酶白加了，并且结果也会受到质疑。
这也是进口的胰酶价格那么多年居高不下，为了减少酶的用量，往往得来个过夜酶切来确保最佳性价比，却又忽略了延长反应时间引入的实验结果波动（毕竟波动不是肉眼可见）。这么多年来有数以百计的文献对酶切的方式方法进行了探讨，改变反应条件、提高比例、设置多酶切等等。但成本提升、试剂特殊、时间延长、操作繁琐等副作用给高通量蛋白质组学应用带来诸多不便。
那究竟什么是好酶？
易算经过深思熟虑以及和酶工程的VVIP客户的深入地讨论，决定这事得提上日程！
一起干就完事了！目标是蛋白人不要谈酶色变！
历经近一年的反复测试，易肽2025款试剂盒全面升级，其中重要升级内容之一就是全新一代酶切体系，您可以更加自信的采用易肽策略进行最高性价比，最高通量的蛋白质处理步骤：
酶切策略 | 优点 | 缺点 |
单胰酶 用量：1:50-1:100 时间：10小时+ | 成本最低 | 慢、大样本量重复性难控制 |
Tryp+LysC 用量：不同比例 时间：不同时间 | 优化条件缩短时间降低用量 | 步骤复杂，成本也没太低 |
Tryp+LysC 用量：1:10-1:20 时间：1-4小时 | 高通量、少步骤、减少变量 | 酶成本贵好几倍 |
友商最新 | 2-4小时酶切 | 成本高，结果不稳定 |
易肽25micro 时间：0.2-2小时 | 成本低、少步骤，通量高，极短处理时间 | 必须找易算采购 |
易肽25Ex,Ultra 时间：0.2-1小时 | 成本低、少步骤，通量高，极短处理时间，低自酶切干扰 | 必须找易算采购 |
那么实际效果到底如何呢？
测试条件如下，采用293T细胞，1:50用量过夜或1:20用量2小时酶切，价格按照通常能够拿到的100μg单价比较（易肽采用单购酶VIP价）：
方法 | 方案 | 自酶切评价（*越多越优秀） | 价格 |
P家 Gold | 2小时 | **** | 4XX |
过夜 | *** | ||
友商试剂盒 | 2小时 | ** | 2XX |
过夜 | ** | ||
易肽25 micro | 2小时 | **** | 惊喜价格，敬请期待后续... |
过夜 | **** | ||
易肽25 Ex/Ultra | 2小时 | ***** | 惊喜价格就，敬请期待后续... |
过夜 | ***** |
经过不同方法酶切后采用DIA方法定量Trypsin自酶切峰信号强度
（强度越高说明自酶切越厉害，越有可能成为样本中高丰度信号影响鉴定，尤其是在微微微微微量体系中）
如上图，我们进一步采用Eclipse 30分钟DIA测试了国内友商（A,B,C）产品和易肽25版，可以发现在快速酶切体系下，无论蛋白质数量，漏切比例易肽25版均有较明显优势。
当采用易肽25 Ultra进行单细胞的酶切时，可以看到胰酶自酶切峰和最常用的P家酶结果相当：
易肽25 Ultra自酶切
（repeat：强度越高说明自酶切越厉害，越有可能成为样本中高丰度信号影响鉴定，尤其是在微微微微微量体系中，所以我们希望在鉴定量和酶切效率保证的同时，单细胞实验中酶切峰越少越好）P家自酶切
友商自酶切
各位可还记得刚才我写了易肽25版的最低酶切时间仅需要0.2小时？在大队列、空间蛋白质组学研究中，酶切通量成了瓶颈，那么如何提高酶解通量？自然是尽可能提高酶切速度啦，让我们看下易肽Ex极速的表现如何！
如上图，采用293T细胞，易肽25版Ex酶解不同时间对应的漏切率。
（一般DIA数据大概20%就差不多了哦）
至此，谢谢大家的观看，祝愿各位伙伴拥有酶好的酶一天（谐音梗别扣我钱）
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