在质谱样品制备过程中,有一类比较特殊的样品就是胶条,它的前处理工作流程复杂,步骤多,工作效率低,而且处理过程中还极易受到实验人员的角蛋白污染。
然而,考虑到一些特殊的实验目的,小伙伴们又不得不选择胶条样品,进而对关注的目标条带进行质谱鉴定,比如Co-IP样本跑胶后的差异条带。
那怎么办呢?为解决胶条蛋白前处理的上述难题,易算生物推出易肽GelD全自动胶条蛋白前处理工作站,此工作站是为SDS-PAGE胶(包括native胶)上切取胶块的蛋白前处理而设计,实现胶粒的脱色、清洗、干燥、还原烷基化等自动化流程。以下将具体介绍该工作站的特性,以及与手动流程的测试比较。
与传统手动流程相比,该自动化工作站流程大大缩减了人工时间,2-3天的工作量可以一晚上轻松搞定,而且运行后不需要手工介入。
一、易肽GelD系统特性
1. 易肽GelD系统构成
(左)抽吸试剂所用注射泵及载架
(右)借助自动化机械臂在不同样品管间添加/吸弃试剂,吹打胶条
2. 全自动化操作、高通量处理
a. 不同样品管间自动加液
b. 反复多次自动吸弃废液
解放双手,节约手动时间,自动化加液、吸液操作,避免交叉污染,避免操作误差。
最多同时处理96个胶条,一晚上轻松搞定,提高工作效率。
3. 封闭操作环境
全封闭的操作环境,有效避免角蛋白等对样品造成污染。
4. 智能网络功能
软件界面流程化,支持定制化的反应程序设定。
支持远程控制及监控,随时随地了解及控制实验进程。
二、易肽GelD系统测试效果
使用IP-MS样本,平行跑4块胶,一块胶条样本通过手工流程进行胶条蛋白前处理,另外3块胶条样本通过GelD自动化胶条蛋白前处理,后续进行质谱检测,以下对蛋白鉴定结果进行比较。
1. 降低角蛋白污染
TIC图中不难发现,手动流程(RENGONG,浅绿)相比三个自动化流程(AUTO)多了很多杂峰,推测是角蛋白污染。
质谱鉴定结果,纵坐标是峰强度的对数转换,横坐标为鉴定到的蛋白,图中显示手动流程(manual,蓝色)比自动化工作流程(auto)的角蛋白(keratin)峰强度高了至少一个数量级,印证了上述TIC结果。自动化处理中引入的角蛋白则只可能是来自跑胶步骤了。
2. 可靠性
上图展示了GelD流程的目标蛋白质序列覆盖率达到96%,和高水平手工处理结果相当。而覆盖率越高,说明提取效果越理想,污染越少,对目标蛋白质的鉴定和定量也越准确。
3. 系统稳定性
上图显示3个GelD平行处理的结果PCA图很好的聚集在一起,说明系统稳定性良好,并且与手动流程明显区分开,可以有效减少手动操作误差。
适用样本
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