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title: "Spectronaut应用案例视频：DIA-磷酸化蛋白质组定量"
author: "omicsolution"
account: "omicsolution"
published_at: "2021-02-06T10:38:14+08:00"
captured_at: "2026-08-24T11:50:18.825284+08:00"
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# Spectronaut应用案例视频：DIA-磷酸化蛋白质组定量
![图片 1](images/001.gif)

蛋白磷酸化修饰是生物体内非常重要的一种翻译后修饰，在生命体生老病死的过程中扮演者举足轻重的角色。过去几十年，随着液相串联质谱技术（LC-MS/MS）的日益精进，研究者已经能够鉴定数千个磷酸化位点。但如何更深入的解析磷酸化蛋白组学，仍需更好的富集、分离以及检测技术。本文给大家介绍了一种更省时间、磷酸化鉴定率更高、重现性更好液相质谱方法，该方法依赖于1）更优化的磷酸化富集手段；2）更精进的质谱仪；3）更优异的质谱检测技术。让我们来具体看看这些究竟是什么：

1）更优化的磷酸化富集手段：相比传统的依赖TiO2的磷酸化肽段富集策略，本文采用Ti-IMAC beads，更方便快捷，样品起始用量低（仅为200ug），且富集效率更高。采用15分钟短液相梯度，更省时。

2）更精进的质谱仪：采用Thermo Fisher 2017年最新推出的Orbitrap系列超高分辨质谱Q-Exactive HF-X,该质谱仪具有更快速度和更高灵敏度，比上一代Q-Exactive HF性能更为优化。15000分辨率下扫描速度能够达到28Hz。

3）更优异的质谱检测技术及数据分析手段：采用单针注射（single shot）DIA技术，15min梯度，m/z range:472-1145，15000分辨率，48个窗口，每个窗口15m/z, 1Da overlap。采用DDA技术建立谱图库，并利用Spectronaut 进行DIA数据分析。

采用上述方法，磷酸化富集的样品起始用量更低，磷酸化肽段鉴定重现性相比DDA更高（两次技术重复可由78%提高至84%），在15min短梯度内能够鉴定到~7000个磷酸化肽段，比DDA技术提高约3倍。

详细内容敬请观看本次讲座录像