2025 易肽试剂盒焕新——酶切现代化
8分钟8000PG,见过?但我告诉你酶解时长更短呢?——易肽25EX前瞻预览版惊爆来袭
零帧起手,Nature Methods结果轻松重现,来自赛鹰的单细胞奇妙旅程
自从我们发布全新一代易肽试剂盒的宣传资料后,总有小伙伴会问:免疫单细胞这么小的细胞能不能做呢?
来自VVIP客户测试的数据这不来了么。
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话不多说,这次和P家GOLD酶比较等同条件下单细胞效果,除了酶不同之外,其他条件完全相同,即均使用每个单细胞10ng胰酶,孵育2h,16分钟分离梯度+15cm Aurora +Spectronaut19.9,directDIA+全默认参数,human uniprot 20K 库。分别对比了2种尺寸细胞:Molm13以及K562。Molm13直径约为18μm,属于尺寸较小,蛋白含量较低的免疫细胞。A549作为对照组,肺癌细胞系,正常2X-3Xμm直径,蛋白含量较高。
单细胞酶切体系简单说主要关心两点:1. 最直观的信号强度(该指标暂时难以统一标准),或者蛋白鉴定量(相同细胞系,相同分析策略最直观可比);2.胰酶自酶切程度(如果蛋白鉴定结果不理想,则进一步考察是否自酶切过多导致信号占比太多);
本次测试分析了每种细胞各46个,2种酶切因此共检测184个单细胞,结果如下:
1. 信号强度
MOLM13-易肽:平均蛋白定量信号强度2.57(log10)


P家平均2.59(log10),几乎相同


A549-易肽:2.85(log10)


P家2.71(log10),旗鼓相当。
那既然信号相当,鉴定结果是否相当呢?答案是否定的。
MOLM13-易肽:
平均鉴定4033PG,共鉴定4615PG


MOLM13-P家:
平均鉴定3711PG,共鉴定4419PG


A549-易肽:
平均鉴定4974PG,共鉴定5518PG


A549-P家:
平均鉴定4342PG,共鉴定4809PG


易肽均稳定领先8-15%,那可能为啥呢?
当然我可以说是因为易肽25版全新胰酶的效果比较好,但也可以说自酶切的减少能够让更多单细胞本身信号得到检测,因此我们看下胰酶的鉴定覆盖度
2. 胰酶自酶切
易肽Molm13/A549
P家Molm13/A549
可以看到遥遥领先的胰酶低序列覆盖度可以一定程度上解释易肽酶切效果更好的原因。
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        至此,谢谢大家的观看,祝愿各位伙伴拥有酶好的酶一天(谐音梗别扣我钱)


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