在做相对常规的样品的定量蛋白质组学时,经验丰富的研究者基本上都能瞄一眼结果就能判断是否ok。不过参考对象比较少的样品就不那么容易判断了。比如近期拿到一套流式分选的某类型几千个细胞的结果,如下图,30个样品定量蛋白在4800-6000PG左右。


 当然,经验丰富的人可能还会细究下其他指标,比如每个样品大概定量到了40000条多肽,组内CV大约是30%,缺失值比例大概在20%多等。然后TIC看看,好像也没啥问题。



hela标品之类的比较是稍微差点,但毕竟这个是实际样品,又是流式分选的微量样品,有点差距也是正常的。

实事求是的说,拿给我看的时候其实我也觉得没啥大问题,这位客户的色谱体系、数据分析也都是用了我司方案了,质谱也是用了给力得很的timsTOF Pro了,我也不好强行自己打自己脸吧。

然后呢临近过年,闲着也是闲着,要不把前处理换成我司的方案试试?在我一顿忽悠后(其实我也忘了我咋忽悠的了),客户试提取几个样品,又嫌麻烦,就全重提了一遍,过年期间色谱质谱等完全不变就是一顿猛测,下机后一看,真的试试就逝世了。

 

放一起对比下:


上图柱形图是前后定量Protein Group数量对比(蓝色为传统方法提取,橙色为我司方案),提升幅度在30~70%不等,折线图是前后每个样品缺失值比例(灰色为传统方法,黄色为我司方案),减少30~80%不等,而下图则是定量肽段数量对比,更是提升了100%有余(全部按照precursorPG 1%FDR质控),CV则从30%多降低到不到20%

 


只能说没有对比就没有伤害,原来流式分选微量细胞也可以做的和常规实验结果类似,真的是实践出真知,下次再有人问我,我又有可以吹的素材了。不过可怜的客户其他类似的实验都默默的在准备的做了。

不知道或许即将要做类似实验的读者您呢?


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