当然其中最贵的那部分，质谱是当仁不让的核心
那其他呢？前处理？液相？软件？生信？其实都很重要，每一步都得小心翼翼的保证其可靠性和高性能。
那今天我们就来推销下其中容易被忽视但又不可或缺的部分，反向色谱柱。
我们做蛋白质组的打交道最多的当然是C18反相色谱柱了，基本各大品牌都有其主打的色谱柱，同时也有大量实验室采购填料、自己制作空柱子使用。这边我们不再科普反相色谱原理，请自行百度百科。
让我们来列举下日常使用的问题，看看是不是你也会遇到：
价格，高性能的商品化柱当然美，但相应的价格也是令人望而却步，好不容易买了也得小心翼翼的使用，生怕不当心堵了那就只能去哭了；
长度，15cm的现在已经逐渐被抛弃，越来越多的用户开始希望20,25,30 甚至50cm的柱子，毕竟分离性能更好，如果成本和寿命可以不用管，自然谁都乐意用；
填料，柱子的直径、填料材质不同、颗粒大小都会影响柱子的整体性能，然而性能提高的同时，带来的问题一般是：系统柱压，寿命以及自己填柱子能不能稳定的填出性能优秀、稳定可靠的柱子？这些都是值得关切的问题。
在我平时接触的各个用户中，相当一部分是自己拉柱子、填柱子，其余大多是采购质谱公司推荐的商品柱。想要评估它们的性能，当然可以参考我们前一篇推文，使用QuiC软件来进行长期跟踪。
当然，你也可以了解下另一种填料的方式：一体型硅胶
其性能有材质和颗粒大小决定，然后性能越好、颗粒越小对系统要求越高，带来的是难以承受之柱压。
我们知道加上柱温箱自然可以缓解这个问题，但更长的柱子、更小的粒径和更高的柱温成了三方角力，必得有所妥协。
带来的直观改善便是比表面积更大，在相似的塔板数性能下，颗粒状填料色谱柱的柱压远远高于一体型填料色谱柱，这也是为何采用一体型硅胶色谱柱可以轻松实现4米甚至更长的柱长。
另外，一体型硅胶以坚实的结构装在色谱柱中，与色谱柱紧密结合，柱端无需使用筛板，绝对不会发生填料泄露的情况，减少了死体积，避免死体积引起的峰展 宽或者样品回收率低，提高色谱峰的对称性。
一体性硅胶填料孔隙率高，提高了液体流量，不会降低色谱柱的分离效率。较大的、复杂的分析样品，也可以进行快速分析，而无需担心样品分解。
柱压：在thermo Easy nLC 1000联用Lumos的质谱仪器上，我们采用一根内径0.1mm，填料孔径2um，50cm长的柱子，以600nl流速检测，柱压仅仅不到100Bar。
连续不间断使用3个月后，依然保持优秀的峰宽（~10s FWHM)以及检测结果（>5000PG 1%,1%,1%FDR, Hela 0.5ug,120min)。
当然用户最大的痛点就是你这个柱子寿命虽然长，但万一我样品有污染，这一堵柱子岂不是完蛋？对于这类填料与毛细管固定结合，不需要筛板的柱子来说只需要将末端堵塞部位切除1-2mm即可继续使用。而常规C18柱如果发生污染堵塞的情况，只能寄希望于流动相冲洗或者更换。
对于一根50cm，1m甚至4m的柱子，切掉末端1mm，2mm甚至1cm，对性能影响微乎其微。这也是成本的重要组成部分。
另外，现在订购这款色谱柱，随柱子附赠iRT肽段以及质控软件QuiC哦。