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    下周即将举行的HUPO中,Spectronaut即将提前迎来大版本更新,随之而来的directDIA+算法将再度为我们打破DIA定性上限!

    今天我们抢跑官方发布会,为大家带来一如既往的评测介绍。

    Spectronaut17带来的最大更新是directDIA+最新升级,在此版本中,DIA数据直接定性的能力(不依赖于谱图库,无论实验还是预测库)达到史无前例的巅峰,无论进行定性还是非标记定量分析时,采用DDA方法的必要性已经越来越低。如果我们希望用分级建库的方式提升DIA定量深度,也完全可以采用DIA深度分级建库。


1、Hela

    数据来源:采用PreON自动化制备Hela标肽,100ng上样,Aurora3 Elite色谱柱分离,timsTof Pro2 DIA-PASEF 30分钟和Exploris 480 30分钟采集,Spectronaut 17 "directDIA+"以及"directDIA+"联合分级谱图库分别分析。对比DIA-NN1.8.1预测谱图库分析结果。Protein Group及Precursor FDR均1%。

timsTOF Pro2 结果对比

Exploris480 DIA-NN和directDIA+对比

    可以看出虽然directDIA+的Protein Group提升数量不太显著,但真正用于定量的Precursor数量实现了近60%的领先。在一键化联用hybrid方法调用谱图库后,更是领先30%(PG)和100%(Precursor)之多。可以看到,即使不采用预测谱图库,directDIA+算法依然能够实现对简单样品的极深度覆盖。


2、EasyPept EX极微量样品定量

我们进一步测试了EasyPept EX处理极微量细胞的结果。方法上选择20,100,500,1000个Hela细胞,生物学重复10次,EasyPept EX试剂盒处理,其余参数均和常规Hela测试一致。结果如下:

    在20个细胞水平DirectDIA+的无论蛋白还是母离子数量均有显著的领先。那么有老师就会问了,单细胞如何呢?


3、单细胞蛋白定量

    我们采用浙大方老师的单细胞,1-5-10个细胞水平定量数据进行评测(大队列数据后续更新)。在极低量的单细胞水平分析时,我们可以看到基于当前数据直接进行机器学习的DirectDIA+相对于预测谱图算法来说有明显的算法优势,DIA-NN无法检测5-10个细胞的差异,而DirectDIA+则实现了更好的定量结果,并保持极佳的定量一致性。方老师的独门技术也实现了对相对常规提取方式的极高超越!


4、体液蛋白定量DeeP

   在体液去高丰度蛋白质组上,directDIA+有何表现呢?我们做了个简单测试,采用血浆、血清、尿液混样测试分别对比。柱形图为PG,折线为Precursors。


5、临床大队列定量

    真正的实战是DIA的主战场,临床大队列蛋白质组!我们选择了CPTAC的CCRCC,结肠癌数据集。

Clark, D.J., et al., Integrated Proteogenomic Characterization of Clear Cell Renal Cell Carcinoma. Cell, 2019. 179(4): p. 964-983.e31

采用DIA-NN和Spectronaut17 hybrid对比测试:

    CCRCC 182例癌细胞队列对比可以看到SPectronaut17的巨大优势,必将在未来的DIA定量大队列研究中大展拳脚

    更多惊喜,敬请期待HUPO,12月5日后我们补充更新!

易算提供大队列定量蛋白质组全流程方案

    在近期的Spectronaut17和SpectroDive11更新后,围绕蛋白质组的定量解决方案越来越完整,同时也越来越简单、高通量、自动化。易算为您提供全流程定量方案,以上数据在易算提供的方案下将轻而易举的为您实现。

延伸阅读:

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