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货号:OSFP-ASPN | 规格:100μg/管或联系易算定制

产品说明

        易肽 Asp-N 是一款高纯度、低自裂解活性的内切天冬氨酸蛋白酶(Endoproteinase Asp-N), 在最优条件下可选择性地在天冬氨酸(Asp, D)残基的N端发生切割,生成便于LC-MS/MS解析的肽段。 产品适用于常规蛋白质组学、N端测序、翻译后修饰位点解析以及与胰蛋白酶等联合酶切策略。对于在赖氨酸、精氨酸上发生修饰导致其难以酶切的修饰类型可以作为胰酶的有效补充。

    主要特异性:在 Asp(D)残基的N端切割,生成以D为C端的肽段。

    条件依赖的副切位:在某些条件下可能对半胱氨酸酸化形式(Cys-SO3H)或谷氨酸(E)表现有限切割活性(可通过优化pH/缓冲体系抑制)。

    去盐与变性剂:与多数常见变性剂和助剂兼容,仍建议在酶切前进行充分去盐以提升识别特异性和MS响应。


产品状态与储存条件

性状:透明澄清液体或干粉

储存条件:液体-20或-80°C,干粉-20℃,12个月内稳定保存

使用方法

推荐使用条件

  • 缓冲体系:

    • 50 mM 磷酸盐或Tris缓冲液,pH 7.5–8.5(常用:pH 8.0)

    • 可加入少量盐(≤50–100 mM NaCl),若需更高盐浓度请评估对特异性的影响

  • 温度与时间:

    • 37°C孵育3–16小时;复杂样品建议过夜孵育以提高消化完全性

  • 酶/底物比例(w/w):

    • 常规:1:20–1:100

    • 难消化或复杂结构蛋白:1:20–1:50

  • 前处理建议:

    • 还原:5–10 mM DTT或TCEP,37°C 30–60分钟

    • 烷基化:10–20 mM IAA或CAA,室温避光30分钟

    • 去除强变性剂和表面活性剂,尿素≤1–2 M或兼容型表面活性剂低量使用

  • 终止方法:酸化至pH < 3(0.5–1% TFA或甲酸)后进样或脱盐


性能比较
与某知名品牌Asp-N采用1:20,过夜酶切,检测单抗酶切后的质谱匹配结果

酶切特异性对比

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竞品的非特异性(D)酶切肽占比高达62%,而易肽Asp-N的非特异性酶切肽段仅占不到40%而对比
序列覆盖和漏切对比
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轻链覆盖度均实现100%,而竞品因非特异性酶切多而额外覆盖了一部分正常Asp-N无法覆盖的区域,漏切也是易肽Asp-N领先。

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